无菌测试程序

1.0所需设备

LAF
歧管支架组件
真空泵。
钳
剪

2.0所需材料

样品
无菌0.45µm膜过滤器
无菌FTM
无菌SCDM
无菌0.1％w / v蛋白ept水。
70％无菌IPA溶液。
燃气燃烧器
无菌过滤组件
无菌SCDA板
无菌拭子

需要3.0实用程序

真空泵

4.0程序：

4.1膜过滤法

4.1.1成品样品：按照SOP收集要测试的无菌样品。从整个样本中，随机选择LVP和SVP zui终灭菌产品以及无菌灌装产品每批次20件（根据药典）。
4.1.2中间体样品：从LVP瓶装机中随机收集16个预先灭菌的瓶样品进行无菌测试（更换新产品时，应收集16个Ist批次瓶样品），以使每个瓶均应代表瓶子包装机模具的每个型腔。
4.1.3用干净的塑料箱将样品转移到质量控制部门。
4.1.4用70％IPA溶液分别擦拭样品并保存在标有产品名称，批号和批号的干净SS托盘中，然后通过干净的传递箱将样品转移到无菌室进行灭菌。
4.1.5按照SOP准备培养基试管（FTM和SCDM），以制备培养基，将100-100 ml量的试管分配并塞紧。按照SOP的规定，在121ºC和15 psi的压力下将培养基灭菌 20分钟，以进行高压灭菌。
4.1.6高压灭菌后，在试管上贴上培养基名称，培养基批号，并在适当的温度下预孵育试管，即将SCDM试管在20至25ºC的温度下进行孵育，而FT​​GM试管在30至35ºC的温度下进行24-48小时，然后对其进行处理。无菌操作。
4.1.7 按照SOP的规定，在121ºC温度和15psi压力下的不锈钢容器中，高压灭菌服，不锈钢杯，插座单元，剪刀和镊子放置30分钟。
4.1.8灭菌后，冷却内容物，并在SS容器中无菌转移到清洁的通行证盒中。
5.4.1.9将预孵育的无菌培养基试管，SCDA平板，无菌拭子，无菌歧管和0.1％w / v蛋白ept水通过通道箱转移至无菌测试室。
4.1.10按照规定进入无菌室无菌室进出程序的SOP。
4.1.11按照SOP启动LAF，以获取LAF的操作说明。
4.1.12用70％IPA溶液擦去所有待测无菌样品。
4.1.13在开始无菌测试之前，根据SOP在整个测试过程中将SCDA板暴露在指定位置。
4.1.14用管道将过滤歧管支架组件与SS储罐正确连接，并将已消毒的SS杯放在层流气流单元下方的无菌容器中。检查工作LAF的压力计读数，并检查无菌室的温度和湿度
4.1.15 LAF腔室工作压力的压力计读数应在WG的08 – 15mm之间。无菌室的温度读数应为27ºC±2ºC。
4.1.16开启真空泵，但借助单个歧管支架底座上的真空控制键关闭歧管支架组件的真空。现在借助消毒钳在滤杯和容器之间放置0.45m无菌滤膜。
4.1.17通过向过滤器支架中加入约15 ml无菌液体A（0.1％蛋白ept水）来润湿滤膜，并通过真空过滤液体。
4.1.18用无菌SS刀片在燃气燃烧器前切开瓶/小瓶或安瓿的**，立即将不少于LVP的内容物和SVP小瓶的全部内容物转移到膜上。
4.1.19立即在真空下过滤溶液，并用100 ml无菌液体A清洗膜三遍（如果注射用无菌水，则无需使用液体A清洗）。
4.1.20完全过滤后，借助歧管真空控制键停止歧管的真空。
4.1.21在无菌镊子的帮助下小心地提起膜，用无菌SS剪刀无菌地将微孔滤膜切成两半，并通过仅在燃气燃烧器前拔下插头，将一半转移到FTM，另一半转移到SCDM管。
4.1.22在两个试管上贴上产品名称B。编号，批号，测试日期，完成日期和测试依据。
4.1.23同时制备阴性对照，方法是过滤100 ml 0.1％蛋白％水而不是产品样品，用无菌SS剪刀将膜切成两半，将一半转移到FTM，另一半转移到SCDM，并将两个管标记为负面控制。
4.1.24在无菌过程中同时准备一个腔室控制装置，取两支试管，一只为SCDM，另一支为FTM试管，拔出试管的棉塞，并在无菌过程中暴露在LAF中，无菌完成后重新插上试管，然后孵育管作为腔室控制。
4.1.25工作完成后，将所有接种的培养基通过培养箱转移，然后将所有设备和裸露的平板转移到微生物分析部分。
4.1.26立即按照无菌室进出程序中指定的SOP离开程序从无菌区移走。
4.1.27将FTM管在30ºC–35ºC下孵育，将SCDM管在20ºC–25ºC下孵育14天。
根据IP，zui终灭菌产品的培养期不少于7天，无菌填充产品的培养期不少于14天。如果产品符合USP，BP规定，zui终灭菌产品和无菌填充产品的孵育期均为14天。
4.1.28按照SOP启动微生物分析室的LAF，并通过在FTM管中无菌接种10至100 cfu的金黄色葡萄球菌NCIM 2079，铜绿假单胞菌NCIM 2200，枯草芽孢杆菌NCIM 2063和环境菌群来准备四个阳性对照管EF-1.同样地，通过分别用白色念珠菌NCIM 3471，黑曲霉NCIM 1196和环境菌群EF-2分别接种约10至100个细胞来制备三个SCDM阳性对照。2.在30 –35ºC下孵育FTM阳性对照管3天， SCDM阳性对照管在20 –25ºC的温度下放置5天。

4.2结果的观察和解释

4.2.1每天目视检查培养基试管以得出其结论，以得到微生物生长的宏观证据。
4.2.2如果在任何试管中都没有观察到生长的迹象，则要进行测试的产品必须符合无菌测试。
4.2.3除非阴性对照在培养结束前显示阴性，并且阳性对照在指定的培养期内显示出生长，否则测试无效。
4.2.4在确认FTM和SCDM管均生长后，销毁所有阳性对照（通常会在24至48小时内观察到生长）。
4.2.5如果在任何试管中都发现了微生物生长的迹象，则按照SOP进行灭菌测试失败调查，调查其失败的原因。。如果调查报告认为测试无效，则以20个单位重复测试。
4.2.6如果在重复试验中没有发现生长的迹象，则所检验的产品符合无菌试验。如果在重复测试中发现微生物生长的迹象，则所检查的产品不符合无菌测试。
相关：倒置培养皿的培养

5.0注意事项

5.1样品瓶/小瓶在移入无菌室之前以及在无菌操作之前，还应先用已过滤的70％IPA擦拭干净。舱口盖也应使用过滤的70％IPA溶液正确清洁。
5.2无菌操作中或无菌室内所用的任何材料均应进行高压灭菌。
5.3在用无菌加热切割刀片切割之前，应在燃气燃烧器前面适当加热样品瓶/小瓶的**。
5.4无菌操作后应立即清洁废液容器，并用无菌擦拭器用过滤的70％IPA擦拭容器的外表面。

6.0频率

对于LVP –明智的选择
对于SVP –明智的选择

7.0缩写

SOP：标准操作程序
IPA：异丙醇
SVP：小剂量肠胃外
药物LVP：大剂量肠胃外
药物FTM：巯基
乙酸液体培养基SCDM：大豆酪蛋白消化培养基