用于无菌测试的SOP

1.0目标

确保该批产品是无菌的或已灭菌。

2.0范围

该程序适用于所有肠胃外药物剂型和说明书中提及的任何特定材料。

3.0责任

3.1工作：技术助理（微生物学家）/行政人员
3.2检查：主管/经理

4.0问责制

部门主管。

5.0程序

5.1无菌测试的媒体准备

5.1.1按照SOP制备的液体硫乙醇酸培养基。
5.1.2按照SOP进行大豆酪蛋白消化培养基的制备。

5.2中等增长促进试验

5.2.1 按照方法进行生长促进测试。

5.3除胰岛素以外的材料和产品的灭菌测试程序

5.3.1按照SOP和玻璃器皿，在121°C的高压灭菌器中消毒所有必需的配件，以进行无菌测试30分钟，并用DHS在180°C的镊子/切割器切割2小时。按照SOP进行玻璃器皿的清洁和消毒。
5.3.2进入无菌测试室，并按照SOP的礼服程序进行操作。
5.3.3将无菌室的紫外线灯“关闭”，将日光灯“打开”。
5.3.4按照SOP
5.3.5 操作LAF 。用70％过滤IPA擦拭LAF工作台。
5.3.6在测试之前，用70％过滤的IPA消毒样品容器的外表面，并使其干燥。
5.3.7暴露介质板并根据SOP进行区域监控，以进行环境监控。

5.3.8无菌试验的样品量

对于成品：每批或每批20个容器。
对于批量样品：2X50 ml无菌容器中的样品。
5.3.9将过滤组件布置在LAF中，并将其与真空管线/真空泵连接。
5.3.10在无菌镊子的帮助下，将无菌的0.45µ膜置于过滤器支架上，并正确夹紧。
5.3.11在另一个LAF中，借助无菌注射器从安瓿瓶/小瓶/瓶中收集样品溶液到无菌瓶中。对于干粉或冻干的容器，加入无菌水/ 0.1％蛋白ept溶解液，然后将其收集在无菌烧瓶中。
5.3.12在真空的帮助下，通过0.45µ 滤膜无菌过滤收集的溶液。
5.3.13如果测试样品具有任何抗微生物特性/防腐剂，则用3X100 ml新鲜制备的无菌0.1％蛋白ept作为冲洗溶液进行过滤。
5.3.14同时执行0.1％蛋白p水或用于冲洗过滤器的任何其他稀释剂的无菌测试。
5.3.15过滤完成后，打开组件，并用无菌切刀将滤膜切成两等份。
5.3.16用无菌镊子在液体硫代乙醇酸酯培养基中无菌接种一半滤膜，在大豆酪蛋白消化培养基中接种另一半滤膜。保留每种培养基一根试管，不要接种–ve对照。
5.3.17转移培养基试管，使其穿过孵化器进入培养箱。
5.3.18孵育时间和温度如下。
A）巯基乙酸液体培养基：根据所需药典在30 – 35°C下孵育不少于14天。
B）大豆酪蛋白消化培养基：根据所需药典在20-25°C下孵育不少于14天。
5.3.19 经验证的湿热法对产品进行zui终灭菌的产品，应将样品保温7天以上。
5.3.20每天观察培养液中微生物生长的存在（浊度）或不存在（清晰），并按附件一记录下来
。I.5.3.21检查含防腐剂的产品，抑菌和抑菌产品的生长促进特性。完成5.5的无菌测试潜伏期，并记下观察结果。

5.4胰岛素消毒程序

5.4.1按照5.3.1至5.3.17的所有步骤。
5.4.2如果悬浮，将胰岛素晶体溶解在无菌的20％抗坏血酸（约50ml）中。
5.4.3孵育时间和温度如下。
A）硫代乙醇酸液体培养基：NLT 14天为30 – 35°C
B）大豆酪蛋白消化培养基：NLT 14天为20 – 25°C
5.4.4每天观察培养液中是否存在（混浊）或不存在（澄清）微生物生长并记下附件中的观察结果-I.
注意：对于胰岛素zui终产品，将结果记录在胰岛素zui终产品数据表
5.4.5中，按照5.5的规定，在孵育14天后检查培养基的促生长特性
5.5在培养期结束后检查培养基的促生长特性以进行无菌性测试。
5.5.1潜伏期结束后，将每种培养基分散在三个试管中。分别在以下培养基中接种测试生物（约100 cfu / ml）。
1）巯基乙酸液体培养基：（用于需氧和厌氧细菌）
铜绿假单胞菌 -ATCC – 9027金黄色葡萄球菌-ATCC –
6538
Cl.sporogenes-ATCC – 1437
在30 – 35°C下孵育2 – 3天。
2）大豆酪蛋白消化培养基：（用于细菌和真菌）金
黄色葡萄球菌-ATCC – 6538
白色念珠菌-ATCC – 10231
A.niger-ATCC – 16404
在20 – 25°C下孵育5天
5.5.2接受标准：培养基应在其潜伏期内对其生长做出反应。
5.5.3观察培养的培养基试管以促进生长并记下观察结果。
注意：对于胰岛素成品，将结果记录在胰岛素成品数据表中

5.6盲测（控制测验）

5.6.1用无菌注射用水进行无菌试验。
5.6.2请遵循步骤5.3.1至5.5.4。
5.6.3记录观察结果。
5.6.4频率：每周进行一次此测试，然后每六个月与其他人进行交叉检查。
5.6.5验收标准：测试样品应符合无菌测试
。5.6.6结合测试结果的解释。
1）如果样品通过无菌测试，则分析人员有资格进行无菌测试。
2）如果样品在无菌测试中失败，则分析人员需要对无菌测试进行再培训。
5.7无菌试验的观察和解释
5.7.1如果没有发现生长的迹象，则所检查的制剂通过了无菌试验。
5.7.2如果发现了微生物生长的证据，则保留显示该细菌的容器，除非并且通过任何其他方式证明其存在是由于与所检查的制剂无关的原因，否则无菌测试无效且应进行对相同数量的样本进行重新测试。
5.7.3如果在重新测试中没有发现微生物生长的迹象，则所检查的制剂通过了无菌测试。
5.7.4如果在重新测试中发现微生物生长的迹象，则所检查的制剂未通过无菌测试。
5.7.5根据IP如果没有发现微生物生长的迹象，则所检查的制剂符合无菌测试。
5.7.6如果发现微生物生长的证据，则所检查的制剂不符合无菌测试。除非可以清楚地表明测试对与所检查的准备无关的原因无效，否则不要重复测试。
5.7.7仅当满足以下一个或多个条件时，测试才认为无效。
5.7.7.1如果在阴性对照中发现微生物生长。
5.7.7.2无菌测试设施的微生物监测数据显示出故障。
5.7.7.3对所涉及测试所用测试程序的审查发现了一个故障。
5.7.7.4在识别出从容器中分离出的微生物后，显示出微生物的生长，可以毫无疑问地将生长归因于进行测试程序所用的材料和/或技术的缺陷。
5.7.8如果测试被宣布为无效，请重复与原始测试相同的单位数。在重复测试中未发现微生物生长的迹象，所检查的制剂符合无菌测试。在重复试验中发现其微生物生长，并在显微镜下确认，所检查的制剂不符合无菌试验。

6.0缩写

6.1 ATCC =美G典型培养物收集
6.2 IP =印度药典
6.3 LAF =层流气流
6.4 UV =紫外线
6.5 IPA =异丙醇